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Rugai Modificado com Indol e Lisina

Finalidade:

  • Meio de cultura diferencial destinado à identificação presuntiva de Enterobactérias oxidase negativas.

Pontos Importantes:

  • As colônias devem ser recém-obtidas (com no máximo de 24Horas) de bacilos Gram negativos provenientes de meios de isolamento adequados, como o MacConkey Ágar, CLED etc;
  • As colônias devem ser analisadas se são fermentadoras de lactose ou não;
  • Caso a cepa seja lactose negativa esta deve ser submetida ao teste da oxidase. Caso seja oxidase positiva, deve se verificar outra metodologia de identificação;
  • O meio rugai é indicado somente para bactérias fermentadoras;
  • As colônias a serem identificadas são semeadas por picada em profundidade e estriamento de superfície em um tubo;
  • Segue-se de incubação a 35ºC por 18-24h.
  • Após a incubação, é realizada a leitura do meio de Rugai Modificado, e os dados podem ser verificados diretamente on-line através da ferramenta “teste Rugai” no site RenyLab: renylab.ind.br

 

 

Provas:

  • Meio Ápice
  • Desaminação do L-Triptofano: prova positiva quando há desenvolvimento de coloração verde garrafa no ápice do tubo.
  • Fermentação da sacarose: prova positiva quando há desenvolvimento de coloração amarela no ápice do tubo.
  • Fermentação da glicose: o surgimento de cor amarela na porção inferior de meio.
  • Produção de gás a partir da glicose: caso a bactéria em estudo produza gás a partir da glicose.
  • Produção de gás sulfídrico (H2S): a produção de gás sulfídrico é evidenciada pelo surgimento de coloração negra.
  • Hidrólise da ureia:  considera-se a prova positiva quando há a formação de uma coloração azulada na porção inferior de meio.

 

  • Meio lisina
  • Descarboxilação da lisina: A fermentação de glicose reduz o pH deixando o meio lisina amarelo. Quando ocorre a atividade da enzima lisina descarboxilase o pH aumentará, devido a transformação da lisina em uma amina primária: a cadaverina, e o meio voltará a coloração roxa.
  • Motilidade: Quando o crescimento bacteriano fica restrito à linha de picada, considera-se a motilidade negativa, para a motilidade positiva há um crescimento difuso com turvação parcial ou completa do meio;

 

  • Rolha de Algodão
  • Indol: o surgimento de uma cor vermelha caracteriza a prova positiva.

 

OBS: O meio Rugai com lisina não permite uma identificação definitiva e precisa das espécies de Enterobactérias, sendo indispensável o uso de metodologia mais específica.